先看下小编这里的泛素表达质粒的清单,小编习惯性地叫“泛素化杀猪全套”很多刚做泛素化的家人们对这个命名还是看的云里雾里的。
Ub由76个氨基酸组成,通过Gly76残基的羧基与底物或其他Ub分子中ε- Lys残基的氨基连接。底物可以是单泛素化、多单泛素化或具有不同类型泛素链的多泛素化。Ub中的第一个Met1和7个Lys残基(Lys6、Lys11、Lys27、Lys29、Lys33、Lys48和Lys63)都可以形成具有不同构象的特定链键,并可以发挥特定或未知的功能。HA-Ub-WT就是野生型的Ub,对应的单个K的突变就是K6R、K11R、K27R、K29R、K33R、K48R和K63R。所以,将这7个K全部突变为R就得到了K0。在K0的基础上就可以一个个做回复突变,因此可以得到K6、K11、K27、K29、K33、K48和K63,这些Ub都只保留了一个K位点,其他位点的K都突变为R的。Ub-K0质粒的突变构建比较麻烦一点,有了K0之后构建回复突变就容易了。
需要注意的是,有时候用Ub-K0和目标蛋白去做Co-IP,也能检测到目标蛋白的泛素化修饰,可能是目标蛋白发生的是比较少见的M1或G76类型泛素化。由于泛素化支链、混合链的存在,情况会变得很复杂,这方面也是目前泛素化研究的前沿热点。有需要相关质粒的私信小编吧。
免责声明:
1. 《了解这些泛素化质粒的命名,给师弟好好上一课》内容来源于互联网,版权归原著者或相关公司所有。
2. 若《86561825文库网》收录的文本内容侵犯了您的权益或隐私,请立即通知我们删除。