先来做个统计看看大家做WB实验的转膜液有多少人是用甲醇的。
WB实验中的转膜液除了甲醇，还可以加乙醇或者丙醇、乙二醇等。
那么转膜液中为什么要加甲醇呢？
因为在WB样品制备和电泳中，都加入了SDS来增加蛋白质的负电荷，促进蛋白质泳动，而SDS会阻止蛋白质和膜的吸附。因此加入甲醇可以导致SDS和蛋白质解离，从而促进蛋白质吸附到膜上。这也是为什么电泳液配制中要加入SDS，而转膜液配制中没有SDS的原因。甲醇浓度越高，SDS和蛋白质解离越快，然而过高的甲醇会将蛋白质固定在胶上，反而不利于蛋白质转移到膜上。因此转膜液中甲醇的浓度一般为20%。
2/ 甲醇可以降温。转膜时电流和电压会导致液体温度升高，甲醇挥发可以降低转膜液的温度，减少蛋白质的变性降解。这就是为什么回收的旧的转膜液温度升高更快的原因。因此可以在回收的转膜液中补充新的甲醇。
3/ 增加蛋白质溶解度。甲醇作为有机溶剂，可以增加蛋白质在转膜液中的溶解度，从而有利于蛋白质从凝胶中溶解进而转移到膜上。
4/ 降低膜背景。甲醇能够结和膜上的非特异杂质，从而降低膜上的背景信号，提高WB检测的灵敏性。
综合以上转膜液中甲醇的作用得知，转膜液中也可以添加乙醇、丙醇和乙二醇等其他有机溶剂来达到相同或者更优的目的。
我们知道，甲醇具有很强的***性，严重损害造血系统和神经系统尤其是眼部，损伤视神经，从而导致双眼疼痛、视线模糊、视力下降甚至失明等。甲醇中***还能引发心律失常、转氨酶升高和***功能衰退等其他代谢性酸中***症状。
添加甲醇的转膜液在外观上和电泳液没有区别，通常我们为了区分转膜液和电泳液，会用鼻子闻一闻是否有***性气味。甲醇可以通过消化道、呼吸道和皮肤吸收。这也是为什么不建议用鼻子闻来区分电泳液和转膜液的原因。这样的做法显然不利于身体健康。但是如果转膜液中添加乙醇的话，在使用一次后，液体会呈现淡***，使用次数越多，***越深，直至液体发红。这样就能肉眼区分电泳液和转膜液了。
如下图：左为电泳液、中为加甲醇的转膜液、右为加乙醇的转膜液。这样通过颜色就能区分电泳液和转膜液了。
甲醇活化PVDF膜的原理：
另外，目前通常使用的膜是PVDF膜（偏聚***乙烯膜）、NC膜（硝酸纤维素膜）和尼龙膜。PVDF膜在使用前需要用甲醇激活，原理是PVDF膜本身是高度疏水的，加入含有醇基团的化合物能够和PVDF膜表面的***原子发生取代反应，将***原子替换为醇基团，从而增加PVDF膜的亲水性。由此可见，PVDF膜的活化，除了使用甲醇，还可以使用乙醇、丙醇等含有醇基团的化合物。需要注意的是，鸡来源的抗体和PVDF膜和尼龙膜的结合能力较强，容易产生高背景。因此当使用鸡源的抗体时，最好用NC膜。
如果你还在使用甲醇的话，为了身体健康，可以替换成乙醇。
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