1、有关2型糖尿病相关炎症通路的研究300字 DOI：10/16658/ki/1672-4062/2016/08/106 毕业摘要 目的 该文主要为了研究2型糖尿病患者外周血巨噬细胞中是否有ERK及STAT3通路的***酸化激活。方法 收集30例2型糖尿病患者及30名健康体检者的病例资料，提取两管肘静脉血。离心收集上清液用ELISA法检验TNF-及IL-6的分泌水平；收集单核细胞，培养出巨噬细胞；提取蛋白，Western blot 法检测 ERK、p-ERK、STAT3及p-STAT3的表达情况。 结果 与对照组比较而言，病例组中炎性因子TNF-及IL-6的分泌显著增多，差异有统计学意义（P0/05）
2、；糖尿病患者外周血巨噬细胞中普遍存在ERK及STAT3通路的***酸化激活，但两种蛋白的总体表达水平却未见异常，半定量分析后发现，药物组中***酸化蛋白/总蛋白的含量比值与对照组中两者比值比较差异具有统计学意义（P0/05）。 结论 ERK及STAT3两条通路均参与了2型糖尿病的发病过程。关键词 2型糖尿病；肿瘤坏死因子；白介素6；p-ERK；p-STAT3中图分类号 R587/1 文献标识码 A 文章编号 1672-4062（2016）04（b）-0106-031 实验材料及方法1/1 收集病例、提取外周血收集病例资料，提取两管肘静脉血，淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞及单核细胞后换液，留存贴壁的单核细
3、胞培养。1/2 细胞培养1640培养细胞，每23 d传代，待细胞贴壁达到90%左右时实验。1/3 免疫荧光检测巨噬细胞96孔板培养细胞，甲醛固定，5%BSA封闭，加入CD11b过夜，二抗孵育，洗板，加入Hoechst染色剂2 uL，荧光显微镜下观察。1/4 ELISA检测TNF-及IL-6的分泌按照TNF-及IL-6的使用说明，在抗体包被的96孔板中加入标准样品及待测样本、生物标记二抗及酶标试剂，37反应1 h，洗板，加显色剂，加终止液，酶标仪检测波长为450 nm的光密度值。1/5 Western blot检测p-ERK、ERK、STAT3及p-STAT3的表达分别收集细胞，配制等体积等浓度
4、的待测蛋白，配胶、电泳，冰上转膜，5%BSA封闭，敷一抗，4过夜，TBST洗膜，二抗孵育，ECL发光。1/6 统计方法采用SPSS 19/0及ImageJ软件进行统计学分析，数据用（xs）表示，各组间的总体均值采用单因素方差分析，以P0/05表示差异具有统计学意义。2 实验结果2/1 免疫荧光结果见图1。荧光显微镜观察巨噬细胞为单层贴壁细胞，胞体细长呈梭形，发出较多分支。2/2 ELISA检测炎症因子表达结果如下图2、图3。A：病例组，B：对照组：与对照组比较而言，病例组中炎性因子TNF-分泌显著增高，组间比较差异均具有统计学意义（P0/05）。2/3 Western blot 结果图4A。E
5、RK及p-ERK条带图，如下图5A。STAT3及p-STAT3条带图，如下所示。3 讨论超重是糖尿病的危险因素之一，而大部分降糖药物都会引起病***重增加4。2型糖尿病是一种多基因遗传倾向性疾病5，目前已发现20多个候选基因与2型糖尿病有关联，目前世界许多国家都在致力于此方面的研究6，众所周知，炎症与2型糖尿病发病密切相关7，但与2型糖尿病相关的炎症通路目前研究不多，我们的研究正是基于这样的考虑，相信不久的将来会为我们防治或延缓2型糖尿病的发生提供理论依据。该实验首先通过ELISA法检测了炎性因子TNF-及IL-6的分泌情况（见图2，图3），进而证实了炎症参与了2型糖尿病的发生及进展，接下来提取
6、外周血单核细胞，并用CD11b对巨噬细胞进行特异性染色（如图1，a、b、c），证明巨噬细胞被成功提取，收集细胞，提取蛋白，Western blot法检测ERK、p-ERK、STAT3及p-STAT3的蛋白分泌情况（图4a、4b、5a、5b），证明在2型糖尿病伴肥胖的患者中是否存在炎症通路ERK及STAT3的***酸化激活。为糖尿病的诊断及治疗提供了新的治疗方向，临***意义深远。参考文献1 王蕾，罗坤年/2型糖尿病视网膜病变患者血脂与尿微量白蛋白的关系J/上海医学检验杂志，2001，16（1）：24-25/2 Rapoport， Ferreira/PD98059 prevents neurite de
7、generation induced by fibrillar beta-amyloid in mature hippocampal neuronsJ/Journal of Neurochemistry，2000，74（1）：125-133/3 C X Tao，W Nian-Song，F Li-Li，et al/ -elecoxib inhibits growth of human autosomal dominant polycystic kidney cyst-lining epithelial cells through the VEGF/Raf/MAPK/ERK signaling p
8、athwayJ/Molecular Biology ReportsJ/2012，39（7）：7743-7753/4 W Tian，Z Zhang，DM Cohen /MAPK signaling and the kidneyJ/American Journal of Physiology Renal Physiology，2000（4）：593-604/5 Q Zhao，Y Wan，C Wang，et al/ Regulatory mechanism of p38MAPK signaling pathway on renal tissue inflammation in chronic kid
9、ney disease and interventional effect of traditional Chinese medicineJ/China Journal of Chinese Materia Medica， 2012，37（12）/6 曾凯宏/许红霞/牛磺酸抑制糖尿病大鼠视网膜Muller细胞VEGF表达的研究J/生物医学进展，2008，8（4）：601-604/7 YO lbey，E Ozbek，A Sim ek/Pyrrolidine dithiocarbamate treatment prevents ethylene glycol-induced urolithiasis through inhib
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