附录2 实验常用培养基及制备1/ 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）（1） 成分：马铃薯（去皮切块） 300g 琼脂 20/0g葡萄糖（或蔗糖） 20/0g 蒸馏水 1000ml（2）制法：将马铃薯去皮切块，加1000mL蒸馏水，煮沸1020min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000mL。加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，121高压灭菌20min。2/牛肉膏蛋白胨培养基（1）成分： 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g ***化钠 5g 蒸馏水 1000ml PH 7/2（2）制法：121灭菌20min。如配制固体培养基，需加琼脂1520g；如配制半固体培养基，则加琼脂46g。3/察氏琼脂养基（1） 成分：硝酸钠 3g ***酸氢二钾 1g硫酸镁（MgSO47H2O） 0/5g ***化钠 0/5g硫酸亚铁 0/01g 蔗糖 30g琼脂 20g 蒸馏水 1000ml（2） 制法：加热溶解，分装后121高压灭菌20min。4/高氏1号培养基（1）成分： 可溶性淀粉 20g *** 1g 硫酸镁 0/5g ***化钠 0/5g ***酸氢二钾 0/5g 硫酸亚铁 0/01g 琼脂 1520g 蒸馏水 1000ml PH 7/27/4（3） 制法：将上述成分混合，于0/10MPa灭菌20min，备用。5/马丁氏琼脂培养基（分离真菌用）（1）成分： 葡萄糖 10g 0/1%孟加拉红溶液 3/3ml 蛋白胨 5g 琼脂 1520g ***酸二氢钾 1g 蒸馏水 8000ml MgSO47H2O 0/5g（2） 制法：112灭菌30min/。在分别加入2%去氧胆酸钠溶液20ml（分别灭菌，使用前加入），链霉素溶液（10000U/ml）3/3ml（用无菌水配制，临用前加入）。6/糖发酵培养基（1）成分： 牛肉膏 5g PH 7/4 蛋白胨 10g ***酸二氢钠（NaH2PO412H2O ）2g***化钠 3g 0/2%滇麝香草酚蓝溶液 12ml蒸馏水 1000ml（2）制法：葡萄糖发酵罐按上述成分分配好后，按0/5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121高压灭菌15min。其他各种糖发酵管科按上述成分配好后，分装每瓶100ml，121高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5ml糖溶液加入于100ml培养基内，怡无菌操作分装小试管。注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于361培养，一般观察23d。迟缓反应需观察1430d。7/缓冲葡萄糖蛋白胨水液体培养基（MR和V-P试验用）（1）成分： ***酸氢二钾 5g 葡萄糖 5g 多胨 7g 蒸馏水 1000mlPH 7/0（2）制法：溶化后校正PH，分装试管，每管1ml，121高压灭菌15min/（3） 甲基红（MR）试验：自琼脂培养物接种本培养基，于361培养25d，哈夫尼亚菌则应在2225培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，***为***性。甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30ml95%乙醇中，然后加入20ml蒸馏水。（4） （4）V-P试验：用琼脂培养物接种本培养基中，于361培养24d，哈夫尼亚菌则应在2225培养。加入6%-萘酚-乙醇溶液0/5ml和40%氢氧化钾溶液0/2ml，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为***性，应放在361下培养4h再进行观察。8/蛋白胨水、靛基质试剂（1）成分： 蛋白胨（或胰蛋白胨） 20g 蒸馏水 1000ml ***化钠 5g pH 7/4（2）制法：按上述成分配制，分装小试管，121高压灭菌15min。（3）靛基质试剂：柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75ml戊醇中。然后缓慢加入浓***25ml。欧-波试剂：将1个对二甲氨基苯甲醛溶解于95ml95%乙醇中，然后缓慢加入浓***20ml。试验方法：挑取小量培养物接种，在361培养12d，必要时可培养45d。加入柯凡克试剂约0/5ml，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧-波试剂约0/5ml，沿着壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触呈玫瑰红色。注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。9/西蒙氏柠檬酸盐培养基（1）成分： ***化钠 5g 柠檬酸钠 5g 硫酸镁（MgSO47H2O）0/2g 琼脂 20g ***酸二氢铵 1g 蒸馏水 1000ml ***酸氢二钾 1g 0/2%溴麝香草酚蓝溶液 40ml pH 6/8（2）制法：先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热容溶解。然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121高压灭菌15min。放成斜面。10/苯丙氨酸培养基（1）成分： 酵母浸膏 3g ***化钠 5g DL-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸1g） 2g 琼脂 12g ***酸氢二钠 1g 蒸馏水 1000ml（2）制法：加热溶解后分装试管，121高压灭菌15min，使成斜面。11/硫酸亚铁琼脂（硫化氢试验用）（1）成分： 牛肉膏 3g 硫代硫酸钠 0/3g 酵母浸膏 3g ***化钠 5g 蛋白胨 10g 琼脂 12g 硫酸亚铁 0/2g 蒸馏水 1000ml pH 7/4（2）制法：加热溶解，校正pH，分装试管，115高压灭菌15min，取出直立侯其凝固。12/平板计数琼脂（platecount agar/PCA）培养基（1）成分： 胰蛋白胨 5/0g 琼脂 15/0g 酵母浸膏 2/5g 蒸馏水 1000ml 葡萄糖 1/0g pH 7/00/2（2）制法：将上述成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121高压灭菌15min。13/月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤（1）成分： 胰蛋白胨或胰酪胨 20/0g ***酸二氢钾（KHPO4）2/75g ***化钾 5/0g 月桂基硫酸钠 0/1g ***糖 5/0g 蒸馏水 1000ml***酸氢二钾（KHPO4） 2/75g pH 6/80/2（2）制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10ml。121高压灭菌15min。14/煌绿***酸胆盐（GLB）肉汤（1）成分： 蛋白胨 10/0g 0/1%煌绿水溶液 13/3ml ***糖 10/0g 蒸馏水 800ml牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液 200ml pH 7/20/1（2）制法：将蛋白胨、***糖溶于约50ml蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200ml（将20/0g脱水牛胆粉溶于200ml蒸馏水中，调节pH至7/07/5），用蒸馏水稀释到975ml，调节pH，再加入0/1煌绿水溶液13/3ml，用蒸馏水补足到1000ml，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10ml。121高压灭菌15min。15/结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）（1）成分： 蛋白胨 7/0g 中性红 0/03g 酵母膏 3/0g 结晶紫 0/002g ***糖 10/0g 琼脂 1518g ***化钠 5/0g 蒸馏水 1000ml 胆盐或3号胆盐 1/5g pH 7/40/1（2）制法：将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调节pH/煮沸2min，将培养基***至4550倾注平板。使用前临时制备，不得超过3h。16/缓冲蛋白胨水（BPW）（1）成分： 蛋白胨 10/0g ***酸二氢钾 1/5g ***化钠 5/0g 蒸馏水 1000ml ***酸氢二钠（含12个结晶水） 9/0g pH 7/20/2（2）制法：将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10min，煮沸溶解，调节pH，121高压灭菌15min。17/四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液（1）成分/基础液： 蛋白胨 10/0g 碳酸钙 45/0g 牛肉膏 5/0g 蒸馏水 1000ml ***化钠 3/0g pH 7/00/2除碳酸钙外，将其他成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，再加入碳酸钙，调节pH，121高压灭菌20min。硫代硫酸钠溶液：硫代硫酸钠（含5各结晶水）50/0g，蒸馏水加至100ml，121高压灭菌20min。碘溶液： 碘片 20/0g 碘化钾 25/0g 蒸馏水 加至100ml将碘化钾溶解于少量的蒸馏水中，再投入碘片，振摇玻瓶全部溶解为止，然后加蒸馏水至规定的总量，储存于棕色瓶内，塞紧瓶备用。0/5%煌绿水溶液： 煌绿 5g 蒸馏水 100ml溶解后，存放暗处，不少于1d，使其自然灭菌。牛胆盐溶液： 牛胆盐 10/0g 蒸馏水 100ml加热煮沸至完全溶解，高压灭菌121，20min。（2）制法：基础液900ml、硫代硫酸钠溶液100ml，碘溶液20/0ml、煌绿水溶液2/0ml、牛胆盐溶液50/0ml，临用前，按上列顺序，以无菌操作一次加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分。18/***盐胱氨酸（SC）增菌液（1）成分： 蛋白胨 5/0g ***氢钠 4/0g ***糖 4/0g L-胱氨酸 0/01g ***酸氢二钠 10/0g 蒸馏水 1000ml pH 7/00/2（2）制法：除***氢钠和L-胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，冷至55以下，以无菌操作加入***氢钠和1g/LL-胱氨酸10ml（称取0/1gL-胱氨酸，加1mol/L***溶液15ml，使溶解，再加无菌蒸馏水至100ml即成，如为DL-胱氨酸，用量应加倍）。摇匀，调节pH。19/亚硫酸铋（BS）琼脂（1）成分： 蛋白胨 10/0g 煌绿 0/025g或5/0g/L水溶液5/0ml 牛肉膏 5/0g 柠檬酸铋铵 2/0g 葡萄糖 5/0g 亚硫酸钠 6/0g 硫酸亚铁 0/3g 琼脂 18/020g ***酸氢二钠 4/0g 蒸馏水 1000ml pH 5/00/2（2）制法：将前三种成分加入300ml蒸馏水（制作基础液），硫酸亚铁和***酸氢二钠分别加入20ml和30ml蒸馏水中，柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20ml和30ml蒸馏水中，琼脂加入600ml蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。***至80左右时，先将硫酸亚铁和***酸氢二钠混匀，倒入基础液中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调节pH，随即倾入琼脂液中，混合均匀，***至5055。加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿。 注：本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于温室暗处，超过48h会降低选择性，本培养基宜当天制备，第二天使用。20/HE琼脂（1）成分： 蛋白胨 12/0g 琼脂 18/020/0g 牛肉膏 3/0g 蒸馏水 1000ml ***糖 12/0g 0/4%溴麝香草酚蓝溶液 16/0ml 蔗糖 12/0g Andrade指示剂 20/0ml 水杨素 2/0g 甲液 20/0ml 胆盐 20/0g 乙液 20/0ml ***化钠 5/0g pH 7/50/2（2）制法：将前面其中成分溶解于400ml蒸馏水内作为基础液；将琼脂加入于600ml蒸馏水内。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。加入甲液和乙液于基础液内，调节pH。再加入指示剂，并与琼脂液合并，待***至5055倾注平皿。注：本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性。甲液的配制： 硫代硫酸钠 34/0g 蒸馏水 100ml 柠檬酸铁铵 4/0g 乙液的配制： 去氧胆酸钠 10/0g 蒸馏水 100mlAndrade指示剂： 酸性复红 0/5g 蒸馏水 100ml 1mol/L***溶液 16/0ml 将复红溶解于蒸馏水中，加入***溶液。数小时后如复红褪色不全，再加***溶液12ml。21/木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂（1）成分： 酵母膏 3/0g 柠檬酸铁铵 0/8g L-赖氨酸 5/0g 硫代硫酸铵 6/8g 木糖 3/75g ***化钠 5/0g ***糖 7/5g 琼脂 15/0g 蔗糖 7/5g 酚红 0/08g 去氧胆酸钠 2/5g 蒸馏水 1000ml pH 7/40/2（2）制法：除酚红和琼脂外，其他成分加入400ml蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。另将琼脂加入600ml蒸馏水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂，待***至5055倾注平皿。注：本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于温室暗处。本培养基宜当天制备，第二天使用。22/三糖铁（TSI）琼脂（1）成分： 蛋白胨 20/0g 酚红 0/25g或5/0g/L溶液5/0ml牛肉膏 5/0g ***化钠 5/0g***糖 10/0g 硫代硫酸钠 0/2g蔗糖 10/0g 琼脂 12/0g葡萄糖 1/0g 蒸馏水 1000ml硫酸亚铁铵（含6个结晶水） 0/2g pH 7/40/2（2）制法：除酚红和琼脂外，其他成分加入400ml蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。另将琼脂加入600ml蒸馏水中，煮沸溶解。 将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂，混匀，分装试管，每管约24ml，高压灭菌121，10min或115，15min，灭菌后置成***斜面，呈橘红色。23/尿素琼脂（pH7/2）（1）成分： 蛋白胨 1/0g 0/4%酚红 3/0ml ***化钠 5/0g 琼脂 20/0g、 葡萄糖 1/0g 蒸馏水 1000ml ***酸二氢钾 2/0g 20%尿素溶液 100ml pH 7/20/2(2)制法：除尿素、琼脂和酚***，其他成分加入400ml蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。另将琼脂加入600ml蒸馏水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂后分装，高压灭菌121，15min。***至5055，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2%。分装于无菌试管内，放成斜面备用。（3）试验方法：挑取琼脂培养物接种，在361培养24h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。24/***（KCN）培养基（1）成分： 蛋白胨 10/0g ***酸氢二钠 5/64g ***化钠 5/0g 蒸馏水 1000ml ***酸二氢钾 0/225g 0/5%*** 20/0ml（2）制法：将除***外的成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，分装后121高压灭菌15min。放入冰箱内使其充分***。每100ml培养基加入0/5%***溶液2/0ml（最后浓度为1：10000），分装于无菌试管内，每管约4ml，立刻用无菌橡皮塞塞紧，放在4冰箱内，至少可保存2个月。同时，将不加***的培养基作为对照培养基，分装试管备用。(3)试验方法：将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取1环接种于***（KCN）培养基。并另挑取1环接种于对照培养基。在361培养12d，观察结果。如有细菌生长即为阳性（不抑制），经2d细菌不生长为***性（抑制）。 注：***是剧***药，使用时应小心，切勿沾染，以免中***。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验失败的主要原因是封口不严，***逐渐分解，产生氢***算气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别注意。25/半固体琼脂（1）成分： 牛肉膏 0/3g 琼脂 0/350/4g 蛋白胨 1/0g 蒸馏水 100ml ***化钠 0/5g pH 7/20/2（2）制法：按以上成分配好，煮沸溶解，调节pH。分装小试管。121高压灭菌15min。直立凝固备用。 注：供动力观察、菌种保存、H抗原位相变异试验等用。26/丙二酸钠培养基（1）成分： 酵母浸膏 1/0g ***化钠 2/0g 硫酸铵 2/0g 丙二酸钠 3/0g ***酸氢二钾 0/6g 0/2%溴麝香草酚蓝溶液 12/0ml ***酸二氢钾 0/4g 蒸馏水 1000ml pH 6/80/2（2）制法：除指示剂以外的成分溶解于水，调节pH/再加入指示剂，分装试管，121高压灭菌15min。（3）试验方法：用新鲜的琼脂培养物接种，于361培养48h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。27/血琼脂平板（1）成分： 豆粉琼脂（pH7/47/6） 100ml 脱纤维羊血（或兔血） 510ml（2）制法：加热溶化琼脂，***至50，以无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。28/马铃薯-葡萄糖-琼脂（1）成分： 马铃薯（去皮切块） 5/0g 琼脂 20/0g 葡萄糖 10/0g 孟加拉红 0/033g ***酸二氢钾 1/0g ***霉素 0/1g 硫酸镁（无水） 0/5g 蒸馏水 1000ml（2）制法：上述各成分加入蒸馏水中，加热溶化，不足蒸馏水至1000ml，分装后，121高压灭菌20min。倾注平板，用少量乙醇溶解***霉素加入培养基中。29/营养琼脂培养基（1）成分： 蛋白胨 10g ***化钠 5g 牛肉浸膏 3g 琼脂 1520g 蒸馏水 1000ml（2）制法：将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7/4，过滤分装，121高压灭菌20min，倾注约15ml于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。30/麦芽汁培养基（培养酵母菌和丝状真菌用）（1）从啤酒长购买麦芽汁原液，加水稀释到56Be。（2）自制麦芽汁：取大麦若干，洗净，用水浸612h，置木框内，上盖1块湿布，约在20温度下让其发芽，其间每天冲水12次。待芽长至麦粒长度11/5倍时，停止其生长，然后将其晒干或置50一下烘干。将干麦芽压碎（不能太粗或太细，粗则影响糖化，细会阻碍过滤）。取1份麦芽屑加4份水浸泡1h，然后置5560水浴锅中糖化34h，用碘液滴检至***至无色时表示糖化已完成。然后用绒布过滤。如过滤反复过滤仍不澄明，可用一鸡蛋清充分打匀后倒入糖化液中，加热搅拌至沸，过
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